霉菌毒素吸附剂体外吸附效率的比较研究

2020-05-20 15:47:27      点击:

霉菌毒素是霉菌的次级代谢产物,普遍存在于饲料及其原料中。据报道,全世界至少25%的谷物不同程度地受到霉菌毒素的污染,对饲料业、畜牧业和人类健康造成严重危害[1]。目前已知污染饲料的霉菌毒素约有100多种,主要来自青霉菌属、曲霉菌属和镰刀菌属所,其中对动物危害最严重的霉菌毒素有:黄曲霉毒素 (Aflatoxin, AF)、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)、呕吐毒素(Deoxynivalenol,DON)、烟曲霉毒素(Fumonisin,FUM)等。

控制饲料或食品中霉菌毒素的方法有很多,其中最常用的、最有效的方式是借助霉菌毒素吸附剂]吸附饲料中的霉菌毒素,并与之紧密结合,使霉菌毒素在通过动物消化道时不被动物所吸收,而直接排出体外,从而避免了霉菌毒素对动物的危害。为了比较不同霉菌毒素吸附剂对霉菌毒素的吸附效果,本实验在模拟体内胃肠道环境下,采用两阶段法系统评估了市场上常见的霉菌毒素吸附剂对黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的吸附情况,为更好的解决饲料中霉菌毒素的污染提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 霉菌毒素吸附剂

从国内市场上收集国内及国外企业生产的9种霉菌毒素吸附剂,分别标记为样品A、B、C、D、E、F、G、H、I,Toxfin® S样品由建明工业(珠海)有限公司提供。

1.2 霉菌毒素标准液的制备

1.2.1 0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液的配制(pH 3.0 和pH 6.8)

精密称取35.814 g 十二水合磷酸氢二钠 至900 mL的蒸馏水中,然后用磷酸调节pH值至3.0和6.8,定容后备用。

1.2.2 标准霉菌毒素工作液(pH 3.0)

黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素标准品,分别购自新加坡Pribo 实验室。用pH 3.0磷酸盐缓冲液配制霉菌毒素工作液。工作液中霉菌毒素的含量是根据饲料中霉菌毒素国家限量标准及生产实际情况而设定。

THZ-82 型恒温水浴振荡器;Bio-Rad iMarkTM 酶标仪;SK-1 快速混匀器; Kubota 2420 型高速离心机;黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素酶联免疫定量试剂盒(荷兰,EURO-PROXIMA公司)。

1.4方法

1.4.1 吸附实验

称取50 mg霉菌毒素吸附剂样品于试管中,加入10 mL pH3.0霉菌毒素工作液,体系中霉菌毒素吸附剂的添加量为5 mg/ml。空白对照为不添加任何霉菌毒素吸附剂的10 mL pH3.0霉菌毒素工作液。将试管放在37℃恒温振荡器上,震荡1 h。反应结束后于3 500 r/m离心10 min,ELISA法测定上清液中的霉菌毒素含量。

1.4.2 解吸附实验

上述实验结束后,倾去离心管中上清液,在剩余物中加入10 mL pH6.8磷酸盐缓冲液,37℃恒温震荡1 h。反应结束后于3 500 r/m离心10 min,ELISA法测定上清液中剩余的霉菌毒素含量。

1.4.3 数理处理

根据检测毒素的含量,按下列公式计算霉菌毒素吸附剂的吸附效率。

Y=100×(A-B-C)/A

上式中:Y 表示霉菌毒素吸附剂对霉菌毒素的吸附效率;A表示空白对照组(即霉菌毒素工作液中不加吸附剂)含量;B表示吸附试验中上清液中霉菌毒素的含量;C表示解吸附试验中上清液中霉菌毒素的含量。

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